ABI_Stepone 熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快有效性、實驗結果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞機遇與挑戰。在實驗技術成熟的今天廣泛關註，也許對你來說，最難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見集成技術、分析實驗室目前乃至將來的需求就能壓製、平衡實驗室的預算更合理，更要詳細研究各種極富吸引力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品更優美，您又該如何選擇呢各方面？
建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區(qū)：
誤區(qū)一：儀器通道越多越好
隨著PCR技術的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧成效與經驗，熒光定量PCR儀也不能幸免適應性。從最初推出的單通道熒光定量PCR儀發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀稍有不慎，眼花繚亂的選擇讓人無所適從方法，就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區(qū)。
在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時提供有力支撐，為了確保實驗結果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX（一種熒光染料）或?qū)Ｓ玫腞eference dye 穩中求進，這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來最深厚的底氣，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個協同控製，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。有的熒光定量PCR的檢測通道是只為自已廠家的專用的熒光染料或試劑開放的品質，有效檢測通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多利用好。在購買前確認ABI_Stepone 熒光定量PCR儀的有效檢測通道尤為重要，不能單單只聽宣傳解決問題。
考慮多重熒光定量PCR的通道數(shù)的時候也應該從實驗室實際情況出發(fā)系列，多重PCR并非人人適用、人人可用相互配合，因為它使實驗復雜化了慢體驗。
誤區(qū)二：real-time PCR儀無需梯度功能
對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度（Tm值）智能化，但運用的公式不同科技實力、引物序列不同，Tm值的差異會很大建設。引物的熔解溫度決定了退火溫度在此基礎上。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化，對于特殊片斷前來體驗，經(jīng)驗公式得到的數(shù)據(jù)不一定能得出準確的結果自主研發，退火溫度細微的差異對結果都可能產(chǎn)生決定性的影響，因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題更加廣闊。梯度PCR的出現(xiàn)部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在特定范圍內(nèi)按照梯度變化損耗，根據(jù)結果，一步就可以摸索出適合的反應條件非常完善。
不單退火溫度性能穩定，連變性溫度和延伸溫度都可以優(yōu)化——對于多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen全面革新、Clontech、Promega的多數(shù)高保真Taq酶來說這個非常重要越來越重要，因為Taq和校正酶的最佳反應溫度可能有顯著差異線上線下，優(yōu)化延伸溫度就顯得很重要。
使用有梯度功能的ABI_Stepone 熒光定量PCR儀可以一次完成以往多次實驗才能完成的優(yōu)化過程近年來，簡化了摸索 PCR反應條件的繁瑣實驗講道理，既節(jié)省實驗時間提高效率，又節(jié)省實驗成本技術先進。
