ABI_7500熒光定量PCR儀是一款廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的高精度設(shè)備相對較高。作為實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的重要代表部署安排，它廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析解決方案、病毒檢測(cè)供給、突變檢測(cè)更加廣闊、病原微生物監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。
一完善好、熒光定量PCR技術(shù)概述
熒光定量PCR（QuantitativePCR充分發揮，qPCR）是一種用于定量分析特定DNA或RNA樣本的技術(shù)。與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)不同高效利用，qPCR通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的熒光信號(hào)來定量分析DNA或RNA的濃度特征更加明顯。此技術(shù)通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光探針或染料，利用熒光信號(hào)強(qiáng)度的變化來評(píng)估目標(biāo)基因的擴(kuò)增過程講實踐。
在qPCR過程中空間廣闊，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)會(huì)隨著擴(kuò)增反應(yīng)的進(jìn)行而增加，儀器通過監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化改革創新，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線知識和技能，能夠精確地計(jì)算出樣本中目標(biāo)基因的相對(duì)或絕對(duì)濃度。
二新模式、工作原理
ABI_7500熒光定量PCR儀是通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化來實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的定量分析實現。其基本工作原理包括以下幾個(gè)核心步驟：
1.PCR反應(yīng)體系的建立：首先，研究人員需將DNA樣本組織了、特異性引物服務體系、熒光染料（如SYBRGreen）或熒光探針（如TaqMan探針）加入PCR反應(yīng)體系中。PCR反應(yīng)體系的組分通常還包括緩沖液搶抓機遇、dNTPs分析、DNA聚合酶等。
2.熱循環(huán)反應(yīng)：PCR反應(yīng)通過溫控系統(tǒng)進(jìn)行熱循環(huán)全面闡釋，通常包括三個(gè)階段：變性（95°C）非常激烈，退火（55-65°C），延伸（72°C）引人註目。在每個(gè)擴(kuò)增周期結(jié)束后領域，儀器會(huì)通過光學(xué)系統(tǒng)實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化。
3.熒光信號(hào)的采集：隨著DNA擴(kuò)增的進(jìn)行好宣講，PCR產(chǎn)物數(shù)量逐漸增加註入新的動力，熒光染料或熒光探針在PCR產(chǎn)物上結(jié)合并發(fā)出熒光。ABI7500儀器通過光學(xué)模塊檢測(cè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光強(qiáng)度，并在每個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)記錄熒光值雙重提升。
4.數(shù)據(jù)分析：熒光信號(hào)的強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比。通過監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的變化長遠所需，ABI7500能夠計(jì)算出PCR擴(kuò)增曲線的閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）求索。Ct值與目標(biāo)DNA的初始濃度相關(guān)讓人糾結，較低的Ct值意味著樣本中目標(biāo)基因的初始濃度較高。
5.結(jié)果解讀：能夠自動(dòng)生成擴(kuò)增曲線圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線穩定發展，通過比對(duì)未知樣品的Ct值與標(biāo)準(zhǔn)曲線基石之一，得到目標(biāo)基因的定量數(shù)據(jù)。對(duì)于定量表達(dá)分析增持能力，還可以通過相對(duì)定量（ΔΔCt法）來計(jì)算樣本中目標(biāo)基因與內(nèi)參基因的表達(dá)水平變化共同努力。
三、ABI_7500熒光定量PCR儀的技術(shù)核心
1.高效的熱循環(huán)系統(tǒng)：配備了精準(zhǔn)的熱循環(huán)模塊影響，可以快速新的動力、均勻地控制溫度變化，保證PCR反應(yīng)的高效性和一致性發展契機。該系統(tǒng)確保每個(gè)擴(kuò)增周期都能夠?qū)崿F(xiàn)最佳的反應(yīng)條件廣泛關註，從而提高了結(jié)果的可靠性。
2.精確的熒光檢測(cè)：采用高性能的光學(xué)系統(tǒng)發力，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)優勢領先。其采用了多通道熒光檢測(cè)，支持SYBRGreen共創美好、TaqMan探針等多種熒光探針或染料的應(yīng)用推動並實現，具有靈敏度高、背景低覆蓋範圍、信號(hào)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)優化程度。
3.多重反應(yīng)能力：能夠進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，即在同一反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因奮勇向前。通過使用不同熒光染料或探針不斷豐富，研究人員可以在一個(gè)反應(yīng)管中檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)，節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本和時(shí)間組建。
4.數(shù)據(jù)分析與結(jié)果導(dǎo)出：配備了功能強(qiáng)大的分析軟件創新的技術，能夠自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并生成各種報(bào)告。通過內(nèi)置的軟件顯著，用戶可以輕松實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的定量、相對(duì)定量分析開放以來，以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析占。
四、應(yīng)用優(yōu)勢(shì)
1.高靈敏度：具備高的檢測(cè)靈敏度提供了有力支撐，可以精確測(cè)量低濃度的DNA或RNA樣本激發創作，適用于微量樣本的定量分析。
2.操作簡(jiǎn)便：其友好的用戶界面和智能化的軟件設(shè)計(jì)進一步意見，使得操作過程更加簡(jiǎn)便易行增幅最大，降低了操作人員的技術(shù)要求共享應用。
3.高通量檢測(cè)：支持96孔板和384孔板的檢測(cè)，適合大規(guī)模樣本的高通量檢測(cè)需求標準，廣泛應(yīng)用于臨床診斷示範推廣、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域重要作用。
4.精確的定量結(jié)果：通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化持續向好，ABI7500能夠提供準(zhǔn)確的定量數(shù)據(jù)，為基因表達(dá)研究充足、病原檢測(cè)等提供可靠依據(jù)進展情況。
