BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀是一種強(qiáng)大的單細(xì)胞分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)發展邏輯、腫瘤學(xué)建議、血液學(xué)系統、干細(xì)胞研究和藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域必然趨勢。它能夠快速、高效地對(duì)細(xì)胞或微粒進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè)有效保障，并提供定量和定性分析部署安排。
工作原理
BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀的核心原理是利用激光束照射單個(gè)細(xì)胞，并通過(guò)檢測(cè)散射光和熒光信號(hào)來(lái)分析細(xì)胞的物理和生化特性脫穎而出。其基本工作流程如下：
1.樣本制備：待測(cè)細(xì)胞或微粒被熒光標(biāo)記（如抗體偶聯(lián)熒光染料）后制成單細(xì)胞懸液拓展應用。
2.流體聚焦：樣本通過(guò)鞘液包裹，形成單細(xì)胞流結構，確保細(xì)胞逐個(gè)通過(guò)檢測(cè)區(qū)管理。
3.激光激發(fā)：細(xì)胞流經(jīng)激光束時(shí)，熒光染料被激發(fā)并發(fā)射特定波長(zhǎng)的光能力建設。
4.信號(hào)檢測(cè)：
-前向散射光（FSC）：反映細(xì)胞大小模樣。
-側(cè)向散射光（SSC）：反映細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜度（如顆粒度）。
-熒光信號(hào)：反映特定分子（如表面標(biāo)志物服務、胞內(nèi)蛋白）的表達(dá)水平很重要。
5.數(shù)據(jù)分析：計(jì)算機(jī)系統(tǒng)收集信號(hào)，通過(guò)軟件（如FlowJo覆蓋、FCSExpress）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和可視化分析異常狀況。
在細(xì)胞表型分析中的應(yīng)用
細(xì)胞表型分析是流式細(xì)胞儀經(jīng)典的應(yīng)用之一，主要用于鑒定和分類不同細(xì)胞亞群高效。例如：
1.免疫細(xì)胞分型
在免疫學(xué)研究中應用創新，流式細(xì)胞儀可區(qū)分T細(xì)胞（CD3+）、B細(xì)胞（CD19+）機構、NK細(xì)胞（CD56+）等的特性，并進(jìn)一步細(xì)分亞群（如CD4+輔助T細(xì)胞和CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞）。通過(guò)多色熒光標(biāo)記（如10色以上流式）攜手共進，可以同時(shí)分析多種表面標(biāo)志物共同，揭示免疫系統(tǒng)的精細(xì)調(diào)控機(jī)制。
2.腫瘤細(xì)胞鑒定
在白血病和淋巴瘤診斷中經過，流式細(xì)胞儀通過(guò)檢測(cè)腫瘤特異性抗原（如CD34簡單化、CD19力度、CD5）輔助分型。例如系統性，急性髓系白血灿绿叫侣?。ˋML）細(xì)胞可能高表達(dá)CD33和CD117，而慢性淋巴細(xì)胞白血簿痛讼崎_。–LL）細(xì)胞則常表達(dá)CD5和CD23長足發展。
3.干細(xì)胞研究
流式細(xì)胞儀可用于分離和鑒定干細(xì)胞（如CD34+造血干細(xì)胞），并監(jiān)測(cè)其分化狀態(tài)穩步前行。結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子（如OCT4結構不合理、SOX2）的胞內(nèi)染色，可評(píng)估干細(xì)胞的“干性”維持情況逐步改善。
在細(xì)胞功能分析中的應(yīng)用
除了表型分析意見征詢，流式細(xì)胞儀還能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)細(xì)胞功能，包括：
1.細(xì)胞周期與增殖
通過(guò)DNA染料（如PI大大提高、DAPI）染色的必然要求，流式細(xì)胞儀可分析細(xì)胞周期分布（G0/G1、S取得了一定進展、G2/M期）完善好。此外，增殖染料（如CFSE）可追蹤細(xì)胞分裂次數(shù)積極參與。
2.細(xì)胞凋亡與死亡
AnnexinV-FITC/PI雙染可區(qū)分早期凋亡（AnnexinV+PI−）和晚期凋亡/壞死（AnnexinV+PI+）問題分析。Caspase活性檢測(cè)則進(jìn)一步揭示凋亡通路激活情況。
3.細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子與信號(hào)通路
通過(guò)破膜固定技術(shù)交流研討，可檢測(cè)胞內(nèi)因子（如IFN-γ推廣開來、IL-2）或磷酸化蛋白（如p-STAT3），評(píng)估免疫細(xì)胞的功能狀態(tài)相對較高。例如，Th1/Th2細(xì)胞因子的平衡分析有助于理解自身免疫疾病機(jī)制信息。
4.鈣流與活性氧（ROS）檢測(cè)
熒光探針（如Fluo-3相關、DCFH-DA）可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度或氧化應(yīng)激水平，用于藥理學(xué)或毒理學(xué)研究豐富內涵。
技術(shù)進(jìn)展
近年來(lái)生產效率，BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀技術(shù)不斷革新，主要包括：
1.質(zhì)譜流式（CyTOF）：用金屬同位素替代熒光染料適應性，突破傳統(tǒng)熒光通道限制節點，實(shí)現(xiàn)40+參數(shù)檢測(cè)。
2.光譜流式：通過(guò)全光譜解析落地生根，減少熒光串?dāng)_的特點，提高多色實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性健康發展。
3.成像流式：結(jié)合顯微鏡功能，在獲取熒光數(shù)據(jù)的同時(shí)記錄細(xì)胞形態(tài)系統。
4.微流控芯片：實(shí)現(xiàn)低成本非常重要、便攜式細(xì)胞分析，適用于床邊檢測(cè)（POCT）空間廣闊。
