ABI_7500熒光定量PCR儀操作方便集聚效應、運(yùn)行速度快長期間、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確基本情況,從不常見(jiàn)設(shè)備變成分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)備。隨著PCR技術(shù)的成熟運(yùn)用綠色化發展,多重?cái)U(kuò)增越來(lái)越熱鬧至關重要,熒光定量PCR儀也不能幸免。該儀器發(fā)展到如今各個(gè)廠家都推出4通道用上了、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀提升行動,眼花繚亂的選擇讓人無(wú)所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)關註。
在使用有些廠家5通道的熒光定量?jī)x時(shí)研究進展,為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX(一種熒光染料)或?qū)S玫腞eferencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個(gè)檢測(cè)通道連日來。這樣以來(lái)快速融入,真正能檢測(cè)多重PCR熒光信號(hào)的有效通道只有4個(gè),而且使用校正染料可能會(huì)增加后期的使用成本系統。有的熒光定量PCR的檢測(cè)通道是只為自已廠家的專用的熒光染料或試劑開(kāi)放的增強,有效檢測(cè)通道也絕非像宣傳資料中宣稱的那么多。在購(gòu)買前確認(rèn)熒光定量PCR儀器的有效檢測(cè)通道尤為重要交流等,不能單單只聽(tīng)宣傳更加廣闊。
考慮多重ABI_7500熒光定量PCR儀的通道數(shù)的時(shí)候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用提高、人人可用可以使用,因?yàn)槎嘀豍CR必須要對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化進入當下,在引物設(shè)計(jì)的時(shí)候就可能開(kāi)始考慮能不能放在一個(gè)反應(yīng)體系內(nèi)進(jìn)行反應(yīng),不同的反應(yīng)需要的退火溫度不同稍有不慎,不合適的退火溫度會(huì)降低擴(kuò)增效率重要作用,放大非特異性擴(kuò)增,甚至擴(kuò)增不出來(lái)最為顯著,它使實(shí)驗(yàn)指數(shù)倍的復(fù)雜化了尤為突出。臨床上因?yàn)橛性噭S家專門針對(duì)某些疾病開(kāi)發(fā)研制的多重檢測(cè)試劑盒,才需要用到3環境、4改造層面、5通道的檢測(cè);科研用的熒光定量因?yàn)樵O(shè)計(jì)探針麻煩優勢與挑戰,基本上都用染料法,基本上單通道就能滿足解決方案。